|
|
Analýza relevantních fotoproduktů bilirubinu a jejich biologický význam v problematice novorozenecké žloutenky
Křepelka, David ; Kozlík, Petr (vedoucí práce) ; Zelenka, Jaroslav (oponent)
Novorozenecká žloutenka se objevuje u téměř 60 % donošených a 80 % nedonošených dětí, kde mírně zvýšená koncentrace bilirubinu chrání před oxidačním stresem těsně po narození. Při překročení specifické koncentrace bilirubinu (obvykle nad 340 µmol·l-1 ) může nastat kernicterus. Tomuto se předchází fototerapií modrým světlem (460 nm), jež přeměňuje bilirubin na fotoprodukty, které se snadněji vylučují žlučí a/nebo močí. Publikovaná data ukazují, že se u novorozenců s indikovanou fototerapií mohou v pozdější fázi života objevit klinické obtíže (např. vyšší incidence astmatu, alergií, diabetu 1. typu). Možným důvodem vzniku těchto onemocnění je specifická biologická aktivita fotoproduktů. Tato práce se zabývá separací neznámého fotoproduktu (bend P), který vznikl po 8hodinovém osvícení roztoku bilirubinu modrým světlem. Následně byl tento produkt izolován a separován tenkovrstvou a sloupcovou chromatografií. V další části byla vyvinuta kvantitativní metoda pro analýzu bendu P pomocí LC-MS/MS. Nakonec byly změřeny vzorky moči, plazmy a stolice odebrané 15 novorozencům před a po fototerapii. Výsledky potvrdily vznik bendu P při fototerapii novorozenců. Bend P je nezmapovaný fotoprodukt. Izolace standardu bendu P a následná kvantitativní analýza v biologických vzorcích představují další krok k porozumění...
|
|
|
Study of bilirubin and its oxidation products
Capková, Nikola ; Dvořák, Aleš (vedoucí práce) ; Vejražka, Martin (oponent) ; Holendová, Blanka (oponent)
Fototerapie (PT) modrozeleným světlem (420-490 nm) se řadí mezi standardní léčbu těžké novorozenecké žloutenky, která brání toxickému působení bilirubinu (BR) u kojenců. Vystavením se modrozelenému světlu je BR přeměněn na polárnější fotoizomer (PI) lumirubin (LR) a další oxidační produkty (mono-, di-, tripyrroly), které lze snadněji vyloučit z těla močí a/nebo žlučí. Ačkoli je PT považována za bezpečnou, je doprovázena zvýšeným rizikem různých patofyziologických stavů (zánětlivých procesů, alergií, cukrovky i některých typů rakoviny), zejména u novorozenců s extrémně nízkou porodní hmotností. Účelem této práce bylo pochopení mechanizmu vylučování BR v různých tkáních i buněčných liniích a zkoumání bioaktivních vlastností BR i jeho hlavního fotooxidačního produktu LR. Nejprve jsme se zaměřili na detekci BR v žluči a stolici hyperbilirubinemických potkanů Gunn. Současně jsme testovali antioxidační a prooxidační účinky nekonjugovaného BR u lidských hepatoblastomových (HepG2), proximálních tubulárních (HK2), neuroblastomových (SH-SY5Y) a myších endotelových (H5V) buněk, jejich vystavením postupně se zvyšujícím koncentracím BR. Pro porovnání účinků BR a LR na markery metabolismu a oxidačního stresu byly biologické aktivity zkoumány in vitro na buňkách lidského hepatoblastomu (HepG2), fibroblastu (MRC5)...
|
|
|
Surface-enhanced Raman spectral detection of bilirubin and temporally synchronized monitoring of its photochemical transformations in selected solvents by SERS and electronic absorption spectroscopy
Hrnčířová, Jana ; Vlčková, Blanka (vedoucí práce) ; Procházka, Marek (oponent)
Povrchem zesílené Ramanovy rozptylové (SERS)-aktivní systémy založené na makroskopických Ag agregátech s vnitřní nanohoubovitou strukturou a podmínkách jejich SERS spektrálních měření byly optimalizovány pro selektivní a citlivou detekci biomedicínsky významného, amfifilního žlučového pigmentu bilirubinu (BR) v zásaditém vodném roztoku a jeho roztocích ve vybraných vodou mísitelných rozpouštědlech, konkrétně dimethylsulfoxidu (DMSO) a/nebo vodou nemísitelném rozpouštědle, jmenovitě CH2Cl2. Ag agregáty s vnitřní nanohoubovitou strukturou připravené s pomocí preagregačního činidla HCl byly zvoleny jako optimální SERS-aktivní systémy pro spolehlivou detekci BR ve všech dříve zmíněných rozpouštědlech. Ve všech případech, protonovaná forma adsorbovaného BR byla detegována v Ag agregátech s vnitřní nanohoubovitou strukturou, kam byl BR inkorporován, a jeho charakteristické pásy byly stanoveny pomocí SERS spektrálních měření na excitačních vlnových délkách v rozmezí 445-780 nm. Citlivost SERS spektrální detekce byla vyhodnocena na základě koncentračních hodnot SERS spektrálních detekčních limit (SERS LODs) BR inkorporovaného do Ag agregátů s vnitřní nanohoubovitou strukturou. SERS LOD pro BR v alkalickém vodném roztoku i v DMSO je 1∙10-8 M (s použitím excitační vlnové délky 532 nm/633 nm), což je nejnižší...
|
|
|
Studium adice thiolů na biliverdin, syntéza značených bilirubinů
Felklová, Veronika ; Lešetický, Ladislav (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent)
Biliverdin a bilirubin jsou žlučová barviva, která jsou degradačními produkty hemu. Biliverdin (BV) je zelenomodré barvivo, které je meziproduktem rozkladu tetrapyrolového jádra hemu působením enzymu hemoxygenázy (HO). Konečným produktem této degradace je žlutohnědé barvivo bilirubin (BR), který vzniká z BV díky enzymu biliverdinreduktáze (BVR). Normální a mírně zvýšená hladina bilirubinu v plazmě má cytoprotektivní vlastnosti, naopak vysoké hodnoty bývají často cytotoxické. U případů těžké nekonjugované hyperbilirubinemie (u novorozeňat), se nekonjugovaný bilirubin (UCB) usazuje v centrální nervové soustavě (CNS) a způsobuje tak bilirubinem vyvolanou neurologickou dysfunkci (BIND). Bohužel je zde omezení pro zjištění patofyziologie UCB, které je způsobené obtížným určením obsahu a rozdělení UCB ve tkáních a biologických tekutinách. Hlavním cílem této práce je proto objevení a začlenění ojedinělých metod, které budou základem při zjišťování distribuce bilirubinu. Tento pokrok by měl významný vliv na studium neurotoxicity bilirubinu u novorozeňat. Tato metoda je založená na radioaktivním označení UCB. Přednostně se na navázání vhodné funkční skupiny (thioly) použije atom C10, protože v této poloze by se konformace značeného bilirubinu neměla změnit. A následně se nukleofilní substitucí do molekuly...
|
|
|
Vliv bilirubinu na progresi nespecifických střevních zánětů.
Patková, Anna ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Hronek, Miloslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Vliv bilirubinu na progresi nespecifických střevních zánětů Diplomová práce Anna Patková Vedoucí práce: doc. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Cíl práce: Nespecifické střevní záněty, mezi které řadíme především Crohnovu nemoc a ulcerózní kolitidu, jsou chronické záněty střev, na jejichž patogenezi se pravděpodobně podílí genetická predispozice a faktory vnějšího prostředí. Předpokládá se, že tkáňové poškození je do jisté míry způsobeno také oxidačním stresem. Jak hemoxygenáza-I, tak bilirubin jsou silnými antioxidanty a poskytují protizánětlivý účinek. Cílem této diplomové práce bylo popsat změny exprese HO-I v tlustém střevě normobilirubinemických a hyperbilirubinemických potkanů po indukci akutní či chronické experimentální kolitidy. Metody: Pro tuto práci byli použiti potkani kmene Gunn s vrozeným defektem UDP- glukuronyltransferázy, který je příčinou vzniku hyperbilirubinemie. Kontrolní skupinu tvořili heterozygotní sourozenci těchto potkanů, u nichž jsou hladiny sérového bilirubinu v normě. Všem zvířatům byl podáván dextran sulfát sodný za účelem vyvolání experimentální kolitidy. Potkani byli rozděleni do dvou skupin, z nichž každá obsahovala hyperbilirubinemické i normobilirubinemické jedince....
|
|
|
Vrozené poruchy metabolismu bilirubinu
Šlachtová, Lenka ; Martásek, Pavel (vedoucí práce) ; Baxová, Alice (oponent)
Vrozenené poruchy metabolismu bilirubinu, dědičné hyperbilirubinémie, patří mezi metabolická onemocnění manifestovaná zejména v dětském věku. Nekonjugované hyperbilirubinémie vycházejí z poruch enzymu uridin difosfoglukuronosyltransferázy (UGT1A1) zprostředkovávajícího konjugaci bilirubinu s kyselinou glukuronovou v hepatocytu a jeho eliminaci na rozpustnou formu. V dalším kroku bilirubinové degradace probíhá transport konjugovaného bilirubinu z hepatocytu do žluče pomocí ATP dependentních transportérů ABCC2 (ATP vazebný kazetový protein), OATP1B1 a OATP1B3. Mutace v genech kódujících transportéry bilirubinu způsobují konjugované hyperbilirubinémie Dubin-Johnsonova nebo Rotorova typu. Tato práce se zaměřuje na studium nekonjugované hyperbilirubinémie u adolescentů včetně jejích atypických forem a na defekty v transportéru ABCC2 a jejich fenotypické projevy u člověka.
|
|
|
Využití hmotnostní spektrometrie pro analýzu biologicky aktivních a klinicky významných látek.
Štícha, Martin ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent) ; Tůma, Petr (oponent)
- 7 - ABSTRAKT (CZ) Předložená práce je komentovaným souborem devíti publikací dokumentujících možnosti využití hmotnostní spektrometrie v oblasti strukturní charakterizace vybraných organometalických komplexů, analýz léčiv a jejich metabolitů a monitorování významných biomarkerů metabolických poruch a onemocnění V průběhu práce na tématice disertační práce byly úspěšně realizovány následné dílčí projekty: Návrh a realizace postupu mikropreparace vybraných rheniových komplexů s aromatickými ligandy za použití tetrabutylammonium tetrachlorooxorhenátu jako výchozí látky; příprava oxorhenium(V) komplexů s 1,2-dihydroxybenzenem, 1,2,3- trihydroxybenzenem a 2,3-dihydroxynaftalenem jako ligandy a jejich strukturní charakterizace s pomocí ESI/MS, APPI-MS a LDI-MS; ESI/MS a UV/Vis studie kinetického chování komplexů vznikajících při reakci tetrabutylamonium tetrachlorooxorhenátu s pyrogallolem a katecholem jako ligandy. Zvláštní pozornost byla věnována studiu následných chemických transformací primárně vzniklých Re(V) komplexů; strukturní charakterizace vybraných komplexů ferrocenu s mědí zlatem a stříbrem technikami ESI/MS. V rámci spolupráce na grantovém projektu zaměřeném na metabolismus cholesterolu byla navržena metodologie strukturní charakterizace rozkladných produktů katalytického rozkladu hemu a...
|
|
|
Studium nových rizikových faktorů kardiovaskulárních onemocnění
Eremiášová, Lenka ; Danzig, Vilém (vedoucí práce) ; Vrablík, Michal (oponent) ; Rosolová, Hana (oponent)
Bilirubin je hlavní produkt katabolismu hemu v krevním řečišti s významnými antioxidačními vlastnostmi. Ty se uplatňují u chorob spojených se zvýšeným oxidačním stresem, mezi které patří zejména choroby srdce a cév i nádorová onemocnění. V první části této práce jsem se zabývala zmapováním sérových koncentrací bilirubinu v běžné české populaci, které byly stanoveny na 1 % náhodně vybraném vzorku české populace, současně s prevalencí Gilbertova syndromu. Koncentrace bilirubinu byly stanoveny i v rámci jednotlivých polymorfismů genu UGT1A1 (OMIM*191740) řídícího biotransformaci bilirubinu v játrech, včetně jejich asociace se základními rizikovými faktory aterosklerózy. V rámci této studie jsme v české populaci zjistili i překvapivě vysokou prevalenci zvýšených aktivit jaterních enzymů, které představují další významný rizikový faktor vzniku kardiovaskulárních chorob. V další části této práce jsme stanovili i koncentrace bilirubinu u skupiny pacientů s akutním koronárním syndromem, které byly významně nižší v porovnání s běžnou populací. V druhé části výzkumného projektu byl na polské větvi epidemiologické studie HAPIEE zkoumán vztah plazmatických koncentrací bilirubinu a jednotlivých variant polymorfismů genu UGT1A1 na celkovou a kardiovaskulární mortalitu. Z výsledků vyplývá, že plazmatické...
|
|
|
Bilirubin secretory pathway and its disorders.
Sticová, Eva ; Jirsa, Milan (vedoucí práce) ; Bronský, Jiří (oponent) ; Jirásek, Tomáš (oponent)
Identifikace a funkční charakterizace řady přenašečových systémů na sinusoidální a kanalikulární membráně hepatocytů významně přispěly k objasnění molekulární podstaty dědičných hyperbilirubinémií. Porucha regulace hepatobiliárních transportních systémů se rovněž podílí na vzniku žloutenky u mnoha získaných jaterních chorob. Předkládaná práce rozšiřuje současné znalosti metabolické dráhy degradace hemu s důrazem na nové poznatky o mechanismu transportu bilirubinu v hepatocytech, vyplývající z objasnění molekulární podstaty Rotorova syndromu. První předkládaná práce se zabývá antioxidačním působením bilirubinu v jaterní tkáni u modelu obstrukční žloutenky. Ve druhé práci jsme v rámci charakterizace nemocných s dědičnými formami konjugované hyperbilirubinémie zachytili několik nových mutací v genu ABCC2, jehož deficit podmiňuje Dubin-Johnsonův syndrom. V klíčové třetí práci o Rotorově syndromu jsme ukázali, že příčinou hyperbilirubinémie Rotorova typu je digenní porucha jaterního vychytávání konjugovaného bilirubinu podmíněná deficitem OATP1B1 a OATP1B3. Ukazuje se, že přímo do žluče je secernována pouze část bilirubinu konjugovaného v hepatocytech. Zbytek je nejprve vyloučen do krve prostřednictvím transportéru MRP3 a teprve následně vychytán zpět sinusoidálními transportéry OATP1B1 a OATP1B3. Ve...
|
|
|
Antiproliferative effects of heme catabolic pathway's products
Koníčková, Renata ; Vítek, Libor (vedoucí práce) ; Haluzík, Martin (oponent) ; Farghali, Hassan (oponent)
Předkládaná práce se zabývá metabolismem hemu s hlavním zaměřením na žlučové pigmenty. Data z posledních let ukazují, že bilirubin není jen pouhým odpadním produktem katabolické dráhy hemu, ale že vykazuje řadu významných biologických vlastností, včetně účinků antiproliferačních. Metabolismus bilirubinu však není doposud zcela poznán, což brání posoudit i jeho potenciální působení protinádorové. Cílem předkládané disertační práce bylo tedy osvětlit některé metabolické aspekty katabolické dráhy hemu, se zřetelem na antiproliferační vlastnosti jejích produktů. Vzhledem k faktu, že bilirubin významně ovlivňuje kancerogenezi tlustého střeva, zabývali jsme se nejprve dosud ne příliš známými aspekty metabolismu bilirubinu střevními bakteriemi. Dále jsme studovali neurotoxické účinky bilirubinu na zvířecím modelu hyperbilirubinemických Gunnových potkanů - distribuci v mozku a odbourávání za patologických podmínek, jako jsou např. novorozenecká žloutenka či Criglerův-Najjarův syndrom. Zabývali jsme se možným zlepšením dosavadní léčby závažných nekonjugovaných hyperbilirubinemií a to zvýšením účinků fototerapie podáváním sérového albuminu. Hlavním důvodem těchto studií byla skutečnost, že mechanismy neurotoxických účinků bilirubinu jsou povětšinou shodné s mechanismy, kterými se bilirubin uplatňuje v...
|
host ::
RSS.